Aký je účel purifikácie PCR produktu?
Aký je účel purifikácie PCR produktu?

Video: Aký je účel purifikácie PCR produktu?

Video: Aký je účel purifikácie PCR produktu?
Video: ZEITGEIST: MOVING FORWARD | OFFICIAL RELEASE | 2011 2024, November
Anonim

Prečistenie DNA z a PCR Reakcia je typicky nevyhnutná pre následné použitie a uľahčuje odstránenie enzýmov, nukleotidov, primerov a zložiek pufra. Tradične sa to uskutočňovalo použitím organických extrakčných metód, ako je extrakcia fenolom a chloroformom, po ktorej nasledovalo zrážanie etanolom.

Otázkou tiež je, prečo je potrebné purifikovať produkty PCR?

Musíte purifikovať produkty PCR zbaviť sa nepoužitých primerov, nukleotidov a enzýmov s cieľom optimalizovať úspešnosť ligácie, ktorá udrží a sekvenuje produktu z PCR . Komu očistiť a PCR produkty používa sa vylučovacia chromatografia.

Okrem toho, čo mám robiť po PCR? Ak chcete maximalizovať regeneráciu, opláchnite nádobu s retentátom dvakrát 10 až 20 µl TE alebo vody. Finálny PCR Reakcia môže obsahovať až mikrogram amplifikovanej DNA, ktorá sa môže použiť na rôzne aplikácie molekulárnej biológie. Tieto aplikácie môžu byť viac alebo menej citlivé na zvyškové zložky PCR reakčná zmes.

Niekto sa môže tiež opýtať, ako čistíte produkty PCR?

Klasické metódy používané na čisté hore PCR produkty pred sekvenovaním zahŕňajú gélovú elektroforézu, zrážanie etanolom a stĺpcovú chromatografiu. Aj keď sú tieto metódy pomerne účinné, môžu sa pri paralelnom spracovaní viacerých vzoriek rýchlo stať ťažkopádnymi a vykazujú rôzne stupne straty vzorky.

Prečo sa musí DNA čistiť?

my čisté hore DNA z vodných roztokov na odstránenie tlmivých solí, enzýmov alebo iných látok, ktoré by mohli ovplyvniť následné aplikácie. Príklady zahŕňajú PCR reakciu čisté hore, čisté až po obmedzení trávi a čisté genómu alebo plazmidu DNA kontaminované bunkovými proteínmi/úlomkami.

Odporúča: