Koľko stojí transformácia ligácie?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Naposledy zmenené: 2023-12-15 23:40

Transformácia . Pridajte medzi 1-5 ul podviazanie zmes do kompetentných buniek pre transformácia . Rozšírené podviazanie s PEG spôsobuje pokles v transformácia účinnosť (rýchlo Ligácia Súprava). Elektroporácia sa odporúča pre veľké konštrukcie (>10 000 bp).

Koľko ligačného produktu potrebujem na transformáciu?

Transformácia . Pridajte medzi 1-5 ul podviazanie zmes do kompetentných buniek pre transformácia . Rozšírené podviazanie s PEG spôsobuje pokles v transformácia účinnosť (rýchlo Ligácia Súprava). Elektroporácia sa odporúča pre veľké konštrukcie (>10 000 bp).

Následne je otázkou, čo je ligácia a transformácia? V typickom klonovacom experimente výskumníci najskôr vložia kúsok DNA, napríklad gén, do kruhového kúsku DNA nazývaného plazmid. Tento krok využíva reštrikčné enzýmy a DNA ligázu a nazýva sa a podviazanie . Po podviazanie , ďalším krokom je prenos DNA do baktérií v procese tzv transformácia.

Následne si možno položiť otázku, koľko DNA je potrebné na ligáciu?

Celková koncentrácia vektor + inzert by mala byť medzi 1-10 ug/ml, aby bola účinná podviazanie . Odporúča sa molárne pomery vektor:vložka medzi 1:1 a 1:10 (1:3 je typický). Ak si nie ste istý svojím DNA koncentrácie, vykonajte viacero ligácií s rôznymi pomermi.

Ako dlho môžete uchovávať ligačnú reakciu?

Ligácie môžu vykonávať pri izbovej teplote alebo pri nižšej teplote (napríklad 12-16 °C) cez noc alebo dokonca niekoľko dní, Ak ty som naozaj zaneprázdnený. Môžeš tiež uložiť ligáciu v chladničke a vyberte ho neskôr, aby ste pokračovali v ligovaní pri izbovej teplote dlhý ako nevyhnutné.