Ako sa vypočíta koncentrácia DNA pomocou spektrofotometra?
Ako sa vypočíta koncentrácia DNA pomocou spektrofotometra?

Video: Ako sa vypočíta koncentrácia DNA pomocou spektrofotometra?

Video: Ako sa vypočíta koncentrácia DNA pomocou spektrofotometra?
Video: Грунтовка развод маркетологов? ТОП-10 вопросов о грунтовке. 2024, November
Anonim

koncentrácia DNA je odhadnutý podľa meranie absorbancie pri 260 nm, úprava A260 meranie zákalu ( merané podľa absorbancia pri 320 nm), násobenie podľa faktor riedenia a použitím vzťah, ktorý A260 1,0 = 50 ug/ml čistej dsDNA.

Ľudia sa tiež pýtajú, ako zistíte koncentráciu a čistotu DNA?

Vyhodnotiť Čistota DNA , zmerajte absorbanciu od 230 nm do 320 nm, aby ste zistili ďalšie možné kontaminanty. Najčastejšie výpočet čistoty je pomer absorbancie pri 260 nm delený odčítanou hodnotou pri 280 nm. Dobrá kvalita DNA bude mať A260/A280 pomer 1,7–2,0.

Podobne, čo je dobrá koncentrácia DNA? A dobre kvalitu DNA vzorka by mala mať A260/A280 pomer 1,7-2,0 a A260/A230 pomer väčší ako 1,5, ale keďže citlivosť rôznych techník na tieto kontaminanty sa líši, tieto hodnoty by ste mali brať len ako vodítko pre čistotu vašej vzorky.

Čo sa týka tohto, ako NanoDrop vypočíta koncentráciu DNA?

Hodnotu absorbancie pri 260 nm vynásobíte pevným faktorom (je to 50 pre DNA ) a dostanete koncentrácia DNA . Voilá. (Dobre, technicky je to A260 vzorky s hrúbkou 10 mm, ktorá sa vynásobí 50; NanoDrop vyjadruje A260, ako keby vzorka mala hrúbku 10 mm, ako v štandardnej kyvete).

Prečo sme museli použiť spektrofotometer na kvantifikáciu našej DNA?

A spektrofotometer je schopný určiť priemerné koncentrácie nukleových kyselín DNA alebo RNA prítomnej v zmesi, ako aj ich čistota. Použitím Beer-Lambertov zákon je množstvo absorbovaného svetla je možné dať do súvislosti s koncentráciou absorbujúcej molekuly.

Odporúča: